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水貂养殖业

水貂病毒性肠炎病实验室诊断方法

发布时间:2018-02-05 23:12:05   来源:   标签:水貂病毒性肠炎病实验室诊断方法
内容提要: 根据流行病学、临床症状和病理解剖学变化综合分析,可初步诊断。大批发病和急性传染时,高度腹泻并在稀便内发现黏膜圆柱(管形便)、白血球显著减少、小肠病理切片上皮细胞增大、空泡变性和包涵体出现等,均可作为诊断本病的依据,但要确诊,必须进行实验室检查。1、..

根据流行病学、临床症状和病理解剖学变化综合分析,可初步诊断。大批发病和急性传染时,高度腹泻并在稀便内发现黏膜圆柱(管形便)、白血球显著减少、小肠病理切片上皮细胞增大、空泡变性和包涵体出现等,均可作为诊断本病的依据,但要确诊,必须进行实验室检查。

1、动物试验(动物回归试验)
本试验必须选无病毒性肠炎的幼龄水貂、供作试验用。其他任何动物,均不能代替。目前,病毒性肠炎还无其他试验动物模型。采取典型病貂的肝、脾及肠内容物,制成20%匀浆悬液。每毫升悬液加青、链霉素各10000单位,取1 0~20毫升,给无病毒性肠炎的幼龄水貂用胃管投服。或取上述悬液3~4毫升,给被试水貂腹腔注射。被试水貂单独饲养观察,如在4~5天出现典型的病毒性肠炎症状,即可确诊为本病。

2、琼脂凝胶扩散试验
免疫扩散试验(琼脂凝胶扩散),其原理是抗原、抗体在含有电解质的琼脂凝胶中,可以向四周自由扩散。当抗原、抗体扩散到适当的位置相遇时,则出现肉眼可见的沉淀线,即抗原和抗体特异性结合。这样可以用已知抗原测未知抗体,也可以用已知抗体测未知抗原。该试验适用于病的早期诊断,貂感染后第6天即产生沉淀抗体,阳性检出率可达60%。

(1)1%琼脂凝胶板的制备
取100毫升生理盐水,加高纯度琼脂粉1 克,加热溶解,放56~60℃水中保温。取清洁无划痕,直径约10厘米的玻璃平皿,平放于桌上。将上述保温56~60℃的琼脂添加到平皿内,其厚度为1 毫米左右。放室温冷却后,用直径3~4毫米的金属打孔器打孔。中央打一孔,周围打6个小孔。小孔之间的距离为4毫米。把已知抗原(用福尔马林灭活的水貂肠炎病毒)加入中央孔内。把被检血清分别加入周围孔内。盖上平皿盖,放在37℃恒温箱内,-般经4小时开始出现沉淀线,经12~20小时可作最后判定。在已知抗原与被检血清孔之间,出现清晰沉淀线者,为阳性反应。 用已知的阳性血清,来检查水貂肠炎病毒,方法同上。不同的地方是把已知阳性血清加到中央孔内,被检肠炎抗原加在周围孔内。

(2)被检肠炎抗原的制备
一般取病貂粪便中的黏膜圆柱(黏膜管或管形)或稀便(最好是用黏液管柱),用生理盐水作1 ∶3稀释,甲醛灭活后离心,取上清液作为抗原。这种抗原加抗生素(按制备1 毫升加入5000单位青霉素和3000单位链霉素)可以保存。

 

3、血凝(HA)及血凝抑制(HI)诊断方法

检查病料中病毒抗原时,采用总量为0.1 毫升的微量法。用V型血凝板及0.025毫升金属移液器。将病料作两列完全相同的稀释、第-列每孔补加0.025毫升PBS液作HA试验;第二列孔每孔加0.025毫升8单位抗血清作HI试验。如果第-列孔出现凝集,第二列孔出现抑制,则判为阳性。

 

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